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透析胎牛血清工藝及用途

更新時(shí)間:2022-06-22  |  點(diǎn)擊率:793

細(xì)胞培養(yǎng)基作為細(xì)胞培養(yǎng)基的組成成分,胎牛血清為細(xì)胞生長(zhǎng)提供激素、生長(zhǎng)因子、結(jié)合蛋白、脂質(zhì)、礦物質(zhì)、黏附因子等物質(zhì),促進(jìn)體外細(xì)胞培養(yǎng)。


但在某些研究中,需要避免胎牛血清中一些小分子物質(zhì)的影響,就需要用到特殊處理的血清——透析胎牛血清


今天從生產(chǎn)工藝以及應(yīng)用角度,對(duì)透析胎牛血清進(jìn)行介紹,幫助大家了解Ausbian透析胎牛血清有哪些特點(diǎn)。

透析胎牛血清工藝及用途


透析胎牛血清


一、透析胎牛血清的生產(chǎn)工藝

1、透析胎牛血清是在胎牛血清的基礎(chǔ)上進(jìn)行加工的。
胎牛血清在無(wú)菌條件下要經(jīng)過(guò)多重過(guò)濾,進(jìn)行一系列的檢測(cè):

理化性質(zhì)檢查(如滲透壓和pH值)

成分檢查(如內(nèi)毒素和血紅蛋白)

外源因子檢查(如細(xì)菌、病毒和支原體)

促進(jìn)細(xì)胞增殖的檢查等


透析胎牛血清為保證其性能和安全性,也需具備胎牛血清的這些工藝和檢查。
2、透析胎牛血清,需經(jīng)過(guò)透析處理。

在4°C下用特定的透析膜對(duì)血清在0.15M NaCl中透析。由于該透析膜只允許10 kDa以下的小分子穿過(guò),在滲透壓的作用下,這些小分子便從血清中滲析到透析膜外的NaCl溶液中。10 kDa以下的小分子有化學(xué)小分子、核苷酸、某些激素、鹽、低分子量蛋白質(zhì)、氨基酸、細(xì)胞因子、葡萄糖、殘留抗生素和其他外源分子。


那么透析的效果如何?以及透析到何時(shí)呢?


由于不可能監(jiān)測(cè)全部小分子,因此常選用葡萄糖為代表。血清中葡萄糖<5 mg/dL,即可以停止透析了。透析過(guò)程中,除監(jiān)測(cè)葡萄糖濃度外(可采用葡萄糖氧化酶方法測(cè)定),還需仔細(xì)監(jiān)測(cè)pH值和滲透壓。
3、該透析一般采用切向流過(guò)濾(tangential flow filtration)。

也就是液體流動(dòng)方向與過(guò)濾方向呈垂直方向的過(guò)濾形式。該方式使液體流動(dòng)在濾膜表面產(chǎn)生剪切力,減小了濾膜上的物質(zhì)堆積,保證了穩(wěn)定的過(guò)濾速度。

透析胎牛血清


二、 透析胎牛血清的應(yīng)用


透析胎牛血清主要用于可能需要關(guān)注小分子濃度的特殊研究。這主要包括四個(gè)領(lǐng)域,其中有些領(lǐng)域是相互交叉的,透析胎牛血清應(yīng)用廣泛,以下僅稍作舉例。

蛋白質(zhì)組學(xué)

同位素標(biāo)記

細(xì)胞通訊

報(bào)告基因細(xì)胞系的篩選


1、 細(xì)胞培養(yǎng)條件下穩(wěn)定同位素標(biāo)記技術(shù)(簡(jiǎn)稱SILAC)。
這是一項(xiàng)以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),全稱為Stable isotope labeling with amino acids in cell culture (SILAC)。它將13C或15N標(biāo)記的氨基酸摻入到培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞,來(lái)標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)新合成的蛋白質(zhì),一般培養(yǎng)5-6代,細(xì)胞中的蛋白質(zhì)將都被同位素標(biāo)記。然后質(zhì)譜分析,即可比較經(jīng)過(guò)不同處理的細(xì)胞,其內(nèi)部蛋白質(zhì)豐度的變化。它還可用于正常細(xì)胞與病理狀態(tài)細(xì)胞二者的比較。為避免胎牛血清中天然氨基酸的干擾,這時(shí)就需要用到透析胎牛血清,以保證摻入細(xì)胞蛋白中的氨基酸均為標(biāo)記氨基酸(常采用賴氨酸或精氨酸)。
2、工程細(xì)胞株的篩選。
以常見(jiàn)的工程細(xì)胞株CHO-DFGRˉ為例,該細(xì)胞自身缺乏二氫葉酸還原酶(DHFR),必須在添加了次黃嘌ling、胸腺嘧啶和甘氨酸的培養(yǎng)液中才能得以存活。如將含有目的基因與DHFR基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞,則可以得到在不含上述添加劑的培養(yǎng)基上也能生長(zhǎng)的細(xì)胞克隆。通過(guò)甲氨蝶呤(MTX)進(jìn)一步篩選,可進(jìn)一步得到能表達(dá)大量目的蛋白的細(xì)胞克隆。這時(shí)的胎牛血清由于不含有次黃嘌ling和胸腺嘧啶等,也常作為選擇培養(yǎng)基的一部分,參與陽(yáng)性轉(zhuǎn)染細(xì)胞克隆的篩選。
3、研究某些因子如核苷酸或微量元素如硒、鋅對(duì)某種類型細(xì)胞增殖、分化的影響。
這時(shí)也需要用透析胎牛血清,以避免培養(yǎng)體系中天然存在的這些物質(zhì)的干擾。

透析胎牛血清

透析胎牛血清工藝及用途


三、Ausbian透析胎牛血清


作為一款備受實(shí)驗(yàn)人員青睞的血清,Ausbian透析胎牛血清有以下優(yōu)點(diǎn):


1、內(nèi)毒素更低,細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程更健康。
2、每批都有提供詳盡的檢測(cè)報(bào)告,各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)完整,清晰,實(shí)驗(yàn)人員一目了然。
3、從出廠到實(shí)驗(yàn)室,全程冷鏈運(yùn)輸,不出現(xiàn)凍融現(xiàn)象,血清質(zhì)量能保證。
4、有100ml和500ml大小兩種包裝,實(shí)驗(yàn)人員選擇更方便。
5、
Ausbian®透析胎牛血清,到達(dá)國(guó)內(nèi)后現(xiàn)貨才開(kāi)始銷售,實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有國(guó)際貨運(yùn)風(fēng)險(xiǎn)。


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